产品目录

本试剂盒是通过免疫荧光染色检测NF-κB的主要亚基p65是否转运到细胞核内从而确认NF-κB是否被激活的检测试剂盒。本试剂盒中的NF-κB p65抗体可以识别人、小鼠或大鼠的NF-κB p65亚基，因此本试剂盒可以检测人、小鼠或大鼠细胞或组织中的NF-κB核转运激活。本试剂盒提供了固定液、洗涤液、封闭液、一抗、荧光标记二抗、细胞核荧光染色液、封片液，使用时不必再配制其它任何溶液。

本试剂盒提供了细胞核荧光染色液，可以把细胞核染成蓝色荧光，这样可以清楚地判断NF-κB是否被转运到细胞核内而被激活。仅染色p65，不染色RelB、C-Rel、p50和p52。使用本试剂盒染色后NF-κB呈红色荧光，细胞核呈蓝色荧光。

NF-κB是一种常见的转录因子，可以被炎症因子、生长因子或趋化因子等激活。常见的炎症因子(包括Interleukin-1和TNF-α等)都可以激活NF-κB。NF-κB由两类亚基形成同源或异源二聚体。一类亚基包括p65(也称RelA)、RelB和C-Rel；另一类亚基包括p50和p52。最常见的NF-κB亚基组成形式为p65/p50或p65/p65。

NF-κB未被激活时和IκB-α形成一个复合物，分布在细胞浆中。在炎症因子、生长因子或趋化因子等可以激活NF-κB的刺激存在的情况下，IκB-α会在Ser32和Ser36被磷酸化，随后被泛素-蛋白酶体途径降解。NF-κB和IκB-α解聚后，其核定位序列被暴露，从而被转运到细胞核内促进NF-κB依赖的基因转录。通过免疫染色检测NF-κB的主要亚基p65是否被转移到细胞核内，就可以判断NF-κB是否被激活。

使用本试剂盒检测细胞中NF-κB核转运激活的效果参考图1。

图1．NF-κB激活－核转运检测试剂盒(兔多抗)用于检测HEK293细胞中NF-κB核转运激活的效果图。正常情况下的HEK293细胞中，p65蛋白分布在细胞浆中(图B,D)；在一定浓度的TNF-α刺激下，NF-κB被激活，大多数p65转运至细胞核内(图F,H)。图中蓝色荧光为细胞核染色液(DAPI)的染色效果。实际染色效果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中效果仅供参考。


百奥莱博两种NF-κB激活－p65亚基核转运检测试剂盒的比较请参考下表。

产品货号	YT363	YTB2051
包装	50次	50次
p65抗体类型	兔多抗	小鼠单抗
识别种属	人、小鼠	人、小鼠、大鼠
荧光二抗	抗兔Cy3 (红色荧光)	抗小鼠Cy3 (红色荧光)
细胞核染料	DAPI (蓝色荧光)	DAPI (蓝色荧光)
特异性	★★★★★	★★★★★
检测效果	★★★★★	★★★★★

组分	规格
固定液	50mL
洗涤液	250mL×2
免疫荧光染色封闭液	50mL
NF-κB p65抗体	6mL
抗兔Cy3	6mL
细胞核染色液(DAPI)	50mL
抗荧光淬灭封片液	10mL

保存：固定液和细胞核染色液-20℃保存，其余试剂均4℃保存，半年有效。其中抗兔Cy3和细胞核染色液需避光保存。


如果检测组织切片或6孔板内的细胞样品，至少可以检测50个样品，如果检测96孔板内的样品，至少可以检测250～500个样品。

• 固定液对人体有害，操作时请特别小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。
  
• 免疫荧光染色时，请注意回收使用过的NF-κB p65抗体和抗兔Cy3。回收后至少可以重复使用10次。
  
• 需使用可以观察红色荧光和蓝色荧光的荧光显微镜。
  
• 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• 对于贴壁细胞：
  
  • 吸除培养液，用PBS洗涤1次。
    
  • 加入固定液，固定5～15分钟。固定液的用量充分盖住样品即可，对于6孔板中的样品，通常加入1mL固定液。
    
  • 吸除固定液，用洗涤液洗涤3次，每次3～5分钟。每次洗涤时须尽量吸尽残余液体，同时要保持样品表面有些湿润，不能干掉，最后一遍洗涤完时吸尽洗涤液。
    
  • 加入免疫染色封闭液，室温封闭1小时。免疫染色封闭液的用量充分盖住样品即可，对于6孔板中的样品，通常加入1mL免疫染色封闭液。
    
  • 吸除免疫染色封闭液，加入NF-κB p65抗体，室温孵育1小时或4℃孵育过夜。
    
  • 小心吸出NF-κB p65抗体到适当的容器内，4℃保存，留做下次使用。
    
  • 洗涤液洗涤3次，每次5～10分钟。每次洗涤时须尽量吸尽残余液体，同时要保持样品表面有些湿润，不能干掉，最后一遍洗涤完时吸尽洗涤液。
    
  • 加入抗兔Cy3，室温孵育1小时。抗兔Cy3的用量充分盖住样品即可，对于6孔板中的样品，通常加入1mL抗兔Cy3。
    
  • 小心吸出抗兔Cy3到适当的容器内，4℃保存，留做下次使用。
    
  • 洗涤液洗涤2次，每次5～10分钟。每次洗涤时须尽量吸尽残余液体，同时要保持样品表面有些湿润，不能干掉，最后一遍洗涤完时吸尽洗涤液。
    
  • 加入细胞核染色液(DAPI)，室温染色5分钟左右。细胞核染色液的用量充分盖住样品即可，对于6孔板中的样品，通常加入1mL细胞核染色液。
    
  • 吸除细胞核染色液，用洗涤液洗涤3次，每次3～5分钟。每次洗涤时须尽量吸尽残余液体，同时要保持样品表面有些湿润，不能干掉，最后一遍洗涤完时吸尽洗涤液。
    
  • 滴加适当量的抗荧光淬灭封片液，盖玻片封片后荧光显微镜下观察。NF-κB的染色为红色荧光，细胞核的DAPI染色为蓝色荧光。
• 对于悬浮细胞：
  
  • 离心收集细胞，PBS洗涤1次。吸尽PBS后把细胞适当弹散。
    
  • 加入固定液，轻轻悬浮细胞，固定5～15分钟。
    
  • 离心，去除固定液。
    
  • 加入洗涤液洗涤1次。
    
  • 取少许洗涤液重悬细胞，滴加到盖玻片或载玻片上，做成涂片。充分晾干后继续后续操作。
    
  • 洗涤液洗涤2次，每次5分钟。每次洗涤时须尽量吸尽残余液体，同时要保持样品表面有些湿润，不能干掉，最后一遍洗涤完时吸尽洗涤液。
    
  • 转1.d。后续步骤同1.d起的步骤。
• 对于组织切片：
  
  • 对于石蜡切片先进行常规的脱蜡和水化处理，对于冷冻切片可以直接进行后续步骤。
    
  • 转1.b。后续步骤同1.b起的步骤。

相关搜索：细胞核p65免疫荧光染色试剂盒(兔多抗)，细胞核p65免疫荧光染色试剂盒，NF-κB激活检测试剂盒，p65蛋白染色试剂盒，p65免疫荧光染色试剂盒，NF-κB p65亚基染色试剂盒，NF-κB Activation，Nuclear Translocation Assay Kit